专题二微生物的培养与应用学案无答案.docx

1、专题二 微生物的培养与应用一、 微生物的分离和培养1、 培养基的制备：2、培养基的营养构成：水、 、 、无机盐，在提供上述几种主要的营养物质的基础上，培养基还需满足微生物对 、 、和 的需求。3、培养基的类型及作用标准划分培养基种类特点用途按物理性质划分液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂，如 固体培养基按化学成分划分天然培养基含化学成分不明显的天然成分工业生产合成培养基用化学成分已知的化学物质配制分类、鉴别按用途划分允许特定种类的微生物的生长，同时抑制或阻止其他微生物生长培养、分离出特定微生物，如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入 ，培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入 。根据微

2、生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如用伊红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌（若有，菌落呈黑色）4、无菌技术，主要指消毒和灭菌条件结果常用方法应用范围消毒较为 的物理或化学方法日常用品不耐高温的液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯水消毒水源灭菌强烈的理化因素接种工具玻璃器具、金属用具培养基及容器5、倒平板操作：待培养基冷却至 左右时，在酒精灯火焰附近进行。（P17）6、平板划线操作：平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。（P18）7、稀释涂布平板法：先将菌液进行系列梯度稀释，然后将不同稀释度

3、的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的 。（P19）8、两种纯化细菌方法的比较项目优点缺点适用范围平板划线法可以观察菌落特征，对混合菌进行分离不能计数适用于好氧菌稀释涂布平板法可以计数，可以观察菌落特征吸收量较小，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延适用于厌氧菌和兼性厌氧菌二、 微生物的鉴定1、 鉴定分解尿素的细菌：在以 为唯一氮源的培养基中加入 指示剂，若指示剂变红，则说明该菌种能分解尿素。2、 鉴定纤维素分解菌（1） 原理：纤维素 纤维二糖 葡萄糖 和纤维素等多糖物质形成 ，但并不和纤维二糖和葡

4、萄糖发生这种反应。（2）方法：利用 染色法，如果培养基中出现 ，则说明其中可能含有纤维素分解菌。三、 微生物的筛选和计数1、 土壤中纤维素分解菌的分离的实验流程挑选涂布土壤取样梯度稀释选择培养土壤取样选择培养的目的： 。2、统计微生物数目的方法（1）显微镜直接计数法原理：利用特定计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。方法：计数板计数缺点：不能区分死菌和活菌（2） 间接计数法（活菌计数法）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落则来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大概含有多少活菌。计算公式：每克样品中的菌株数= ，其中

5、C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液体积（mL），M代表稀释倍数。操作：设置重复组，增强实验的说服力和准确性。同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。3、菌种的保存方法：临时保存：低温斜面保藏法长期保存：甘油管藏法典例1、下图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1、2、3、4、5。下列操作方法叙述正确的是（ ）A.在1、2、3、4、5区域中划线前都要对接种环灼烧灭菌，灼烧灭菌后立即进行划线B.1和5划线可以如图所示，也可以相连在一起C.在划线操作结束时，要对接种环灼烧灭菌D. 在5区域中才可以得到单细胞菌落2、下表是从土壤中分离纯化土壤细菌的培

6、养基配方。请回答下面的问题。试剂用量试剂用量牛肉膏/g5琼脂/g20蛋白胨/g10水/mL1 000NaCl/g5(1) 培养基的类型很多,但培养基中一般都含有水、碳源、和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是。培养基配制完成以后,一般还要调节pH并对培养基进行处理。(2) 分离纯化微生物最常用的两种方法 和 。（3） 假设培养结束后,发现培养基上菌落连成一片,可能的原因是什么?(列举两项)_。3、某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌(“目的菌”)。请分析回答问题:(1)培

7、养基中加入化合物A的目的是筛选_，这种培养基属于_培养基。(2)目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的_，实验需要振荡培养，由此推测目的菌的代谢类型是_。(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量_的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量_。(4)可采用_的方法接种到固体平板培养基上，通过_对微生物的数目进行计数，通常需要对菌落数为_的平板进行计数。(5)实验结束时，使用过的培养基应该进行_处理后，才能倒掉。4、多环芳烃菲在染料、杀虫剂等生产过程中被广泛使用，是土壤、河水中常见的污染物之一。下图表示科研人员从被石油污染的土壤中分离获得能降解多环芳烃菲的菌株Q 的主要步骤。请回

8、答：(1)步骤的培养过程中，需将锥形瓶放在摇床上振荡培养，一方面使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率；另一方面能_。(2)步骤用平板划线法纯化菌株Q过程中，在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，原因是_。采用固体平板培养基培养细菌时要倒置培养的主要目的是_。(3)接种环通过灼烧灭菌，完成步骤中划线操作，共需灼烧接种环_次。(4)为了获得分解多环芳烃菲能力更强的菌株，研究人员又对菌株Q进行了诱变处理，得到突变株K。为了进一步鉴定突变株K并比较两种菌株降解多环芳烃菲的能力，设计了下列实验，请补全实验步骤：取9只锥形瓶均分成三组，编号为A、B、C。向A、B、C三组锥形瓶中加入_的培养液。向A、B、C三组培养液中分别加入_。28C恒温培养3天后，测定_。