2013-2014学年高二生物课件：1.3 测定微生物的数量（中图版选修1）.ppt

1、课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测第三节测定微生物的数量血球计数板的构造课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测课程标准1测定某种微生物的数量。2用土壤浸出液进行细菌培养，仅以尿素为氮源，测定能生长的细菌的数量。课标解读1了解测定微生物数量的原理和方法。2观察菌落数，进行微生物数量的统计。3理解稀释平板计数法的原理和操作过程。课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测测定微生物数量的方法可分为两类：_和_。(1)常用方法直接计数法中常用的是_，这种方法是先将待测样品制成_，然后取一定量的悬液放在_下进行计数。测定微生物数量的方法1测定微生物数量的方法2直接计数法直接计数法间接显微镜直接计数法悬液显微镜

2、计数法课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测(2)特点该法所需_，可迅速得到结果，而且在计数的同时能观察到所研究微生物的_。其缺点是难以计数_。这种方法一般适用于_悬浮液中各种_的计数。间接计数法最常用的是_，它是根据微生物的_而设计的计数方法。在样品中含菌数_的情形下，也可以完成计数。3间接计数法设备简单形态特征微小的细菌纯培养单细胞菌体稀释平板计数法培养特征较少课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测(1)常用方法：显微镜直接计数法。1直接计数法课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测(2)过程：先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单

3、位体积内的微生物总数。显微镜直接计数示意图如右：(3)优点：所需设备简单，可迅速得到结果，而且在计数的同时能观察到所研究微生物的形态特征。(4)缺点：难以计数微小的细菌。(1)间接计数法最常用的是稀释平板计数法，它是根据微生物的培养特征而设计的计数方法。2间接计数法课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测(2)过程：将待测样品配制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开。再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内；或是将一定量的稀释液，与溶化后冷却至45 左右的琼脂培养基混合，倾入无菌培养皿中，摇匀、静置待凝。经过培养后，就由单个微生物生长繁殖形成菌落，这

4、样的一个菌落就代表着一个微生物个体。统计培养基中出现的菌落数，即可推算出检测样品中的活菌数。(3)优点：在样品中含菌数较少的情形下，也可以完成计数。(4)缺点：由于死亡的细菌不能繁殖产生菌落，所以稀释平板计数法只计数活菌数，故又称活菌计数法。课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测特别提醒设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。课堂互

5、动探究热点考向示例随堂达标检测显微镜直接计数法的优点是 ()。A直接观察不存在误差B难以计数微小的细菌C所需设备简单，可迅速得到结果，而且在计数的同时能观察到所研究微生物的形态特征D所需设备复杂，还要用到细菌计数板，统计结果误差大答案C【巩固1】课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测土壤中微生物的_和_极其丰富，它们对提高_有重要作用，因此，测定土壤中的_量可以作为判定土壤_的一个重要指标。取土壤表层_ cm处的土样。称取_g土样，放入盛有_ mL无菌水的锥形瓶中，制成_倍的稀释液。土壤中好气性细菌的计数1测定土壤含菌量的意义2制备土壤稀释液种类数量土含菌肥力510 199102壤肥力课堂互动探

6、究热点考向示例随堂达标检测用_3支，分别吸取稀释倍数为_、_、_的土壤稀释液各_ mL，注入到相应编号的培养皿中。将已灭菌_培养基溶化、冷却至_左右时，倾入到上述各培养皿中。待这些接种好的平板培养基冷却后，_放入_的恒温箱中培养_h，直至长出菌落为止。细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有_个菌落为宜。霉菌以每个培养皿内有_个菌落为宜。3取样及倒平板4培养5选取具有合适菌落的稀释倍数并计数无菌移液管1041051060.2牛肉膏蛋白胨琼脂4550 倒置2830 2436 3030010100课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测将统计出的菌落数按下列公式计算，得出每克样品菌数。6计算课堂互动探究热

7、点考向示例随堂达标检测1土壤中好气性细菌的计数土壤中好气性细菌的计数制备土壤稀释液取样倒平板培养观察记录课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测特别提醒 移液时，要将移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高于前一次，让菌液混合均匀并减少稀释中的误差。每配一个稀释度要换用一支移液管。(1)土壤取样土壤微生物大约7090%是细菌。细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表38 cm的土壤层。(2)样品处理样品的稀释程度直接影响平板上生长的菌落数目，选用一定稀释范围的样品液

8、进行培养，保证菌落数在30300之间，便于计数。2土壤中分解尿素的细菌的计数课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测(3)微生物的培养与观察将培养基平板放置于3037 温室中培养12 d，每隔24 h统计一次菌落数目，最后选取数目稳定时的记录作为结果。(4)细菌的计数当菌落数目稳定时，取同一条件下的至少3个平板进行计数，求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测请选出进行土壤中细菌计数的正确的操作步骤()。土壤取样称取1 g土壤放入盛有99 mL无菌水的锥形瓶中 吸取0.5 mL进行平板涂布 依次稀释至102、103、104、105、106倍稀释度

9、ABCD解析 在分离土壤中某细菌时，应先选取土样(1 g)，然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。答案C【巩固2】课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测取少量酵母菌液放入血球计数板直接记数，测得的数目是 ()。A活细胞数B死细胞数C菌落数D细胞总数思维导图：【例1】示例一 微生物的记数方法及特点课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测深度剖析 显微镜直接记数法是测定微生物数量的一种常用方法，由于该法不能区分微生物的死活，故测得的数目为细胞总数。答案D课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测方法技巧 直接计数法与间接计数法直接计数法间接计数法方

10、法原理显微镜直接计数法：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量稀释平板计数法：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌特点设备简单，计数迅速计数的同时能观察微生物的形态特征难以计数微小的细菌一般适用于纯培养悬液中各种单细胞菌体的计数不能区分死细菌和活细菌，计数结果为细菌总数样品中含菌数较少时，也可以进行计数只能对活细菌进行计数，也称活菌计数法操作较复杂，计数时间较长课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测 (安徽理综卷)下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述中

11、，错误的是 ()。A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养2448 hD确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数【例2】示例二土壤中细菌的计数课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测思维导图：深度剖析 确定对照组无菌后，选择菌落数在30300的平板进行计数，D错；A是培养基的灭菌方法，B设置了一系列对照实验，C是细菌的培养方法，A、B、C三个选项均是正确的。答案D课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测归纳总结 土壤中微生物含量不同，其活菌

12、计数时所用的稀释倍数也不同。如：稀释倍数倍数测细菌数：选用104、105、106倍稀释测放线菌数：选用103、104、105倍稀释测真菌数：选用102、103、104倍稀释课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测微生物的计数方法不仅用于科学研究，而且还广泛应用于食品卫生检验、环境污染检测等领域。由于微生物形体微小，需用一些特殊的方法进行计数。(1)稀释涂布平板法(也叫活菌计数法)当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。探究微生物的数量测定技法必备课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测(2)显微镜直接计数

13、法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量，但不能区分细菌的死活。计算公式：每mL原液所含细菌数每小格平均细菌数40010 000稀释倍数。(3)滤膜法以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例，将已知体积的水过滤后，将滤膜放于伊红美蓝培养基上培养，在该培养基上，大肠杆菌菌落呈现黑色，可根据培养基上黑色的菌落数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。步骤如下：制备稀释倍数为102、103、104、

14、105、106的系列稀释液。为了得到更加准确的结果，你选用_(稀释混合平板法、稀释涂布平板法)接种样品。适宜温度下培养。结果分析：能力展示课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测(1)测定的大肠杆菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是 ()。A一个平板，统计的菌落数是23B两个平板，统计的菌落数是22和26，取平均值24C三个平板，统计的菌落数分别是21、5和52，取平均值26D四个平板，统计的菌落数分别是21、30、24和25，取平均值25(2)一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品中的菌数是(涂布平板时所用稀释液

15、的体积为0.2 mL)_。课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测(3)用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量_，因为_。(4)某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了？为什么？_。答案稀释混合平板法(1)D(2)1.17108(3)多 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落(4)不能。因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测在做分解尿素的细菌的分离实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有 ()。由于土样不同

16、 由于培养基污染 由于操作失误没有设置对照ABCD1.课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测解析 A同学比其他同学的实验结果数据大，可能由于选取的土样不同，培养基灭菌不彻底或操作过程中有杂菌污染，也可能是操作失误，如配制培养基混入其他含氮物质、稀释度不够准确等。答案A课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测下面对“从土壤中分离分解尿素的细菌过程中灭菌”的理解，不正确的是 ()。A防止杂菌污染B消灭全部微生物C稀释土壤溶液的过程中必须在火焰旁操作D灭菌必须在接种前进行答案B2课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数。实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将

17、用表土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9 mL无菌水的大试管若干、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90 mL无菌水的锥形瓶、恒温箱、酒精灯。方法步骤：(1)倒平板分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在_操作。3课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测(2)制备土壤稀释液取土样10 g加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌吸管吸取上清液1 mL，转至盛有9 mL的无菌水的大试管中，依次稀释到107稀释度。(3)涂布

18、按照由107103稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布_个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布_个。(4)培养放入恒温箱内，在2830 下培养34 d。课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测(5)细菌的计数当菌落数目稳定时，选取菌落数在_的平板进行计数。如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌数是_。(稀释度是105)(6)预期结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数_(填“多于”或“少于”)无氮培养基上的数目。原因是_。答案(1)酒精灯火焰旁(3)31(5)303005107(6)多于 无氮培养基上能生存繁殖的仅是土壤中的自生固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存课堂互动探究热点考向示例随堂达标检测课堂小结