2014-2015学年高二生物课件：第一部分实验二《微生物的培养和利用》课件6（浙科版选修1）.ppt

1、实验2 分离以尿素为氮源的微生物尿素又称脲,是蛋白质的降解产物,哺乳动物的尿液中含有,植物不能直接吸收尿素,因此,大量尿素的存在对环境造成污染.有些细菌可产生脲酶,以尿素为氮源,脲酶可将尿素分解为氨,被植物吸收.一、实验原理用选择培养基可分离出以尿素为氮源的微生物，这些微生物可产生脲酶，脲酶可将尿素分解为能被植物吸收的氨，因此这类微生物具有一定的生态学价值。稀释涂布平板法统计土壤样品中含有的这种微生物的数目细菌尿素NH3中性碱性酚红颜色：黄色紫红色稀释涂布平板法的原理 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释程度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养，以形成标准菌落 http:/ 尿素培

2、养基（1L）葡萄糖10g NaCl 4.8g K2HPO4 4.8g琼脂20g酚红0.01g尿素80g LB培养基（1L）蛋白胨：10g酵母粉：5g NaCl：10g琼脂：20g 对照组选择培养基实验组LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求.过滤灭菌后的尿素倒平板 需要倒3个LB平板，9个尿素平板LB(对照)尿素10-210-310-4每个稀释度1个LB对照平板3个尿素平板(平行重复组)配制菌悬液1个99ml无菌水2个9ml无菌水得102,103,104的菌悬液1g土壤接种 取100ul菌悬液涂布分离涂布分离涂布前后三角刮刀需要灼烧

3、吗？涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。37倒置培养按浓度捆成一摞恒温37培养防止冷凝水污染培养皿，防止其它细菌污染。五、操作步骤：（学生做）、倒平板：倒个培养基，个尿素固体培养基、制备一定浓度梯度的细菌悬液：g土壤ml无菌水，振荡，为稀释液，依次制备、（.ml无菌水）的土壤稀释液。、稀释涂布分离法分离细菌、制备无菌的固体培养基和尿素固体培养基、培养观察（倒置，度）10-4、10-3,、10-21、为

4、什么要用琼脂糖代替琼脂配置固体培养基 因为琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。如果用琼脂固化培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养上产生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选，故用纯化的琼脂糖而不用琼脂做固化剂思考题：2、有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用 土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨，氨使土壤碱化，氨还与SO42-等离子形成化合物，使土壤板结。而脲酶的细菌不仅使动植物尸体降解，而且利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循环。3、有脲酶的细菌菌落周围为什么有着色的环带出现。细菌向胞外分泌脲酶，使培养基中尿素水解，水解后产生氨，氨为碱性，酚酞在酸性环境里呈黄色，碱性里呈红色。培养基中酸碱指示剂产生颜色变化（变红），标志着存在脲酶水解尿素的作用，从而证明这一菌株以尿素为氮源。4、与全营养培养基上的菌落数比较，为什么尿素培养基上只有少数菌落 表明能利用尿素的细菌在土壤菌落中只占有极少数。