2022届高考生物一轮复习 知识讲义 第十单元生物技术与工程 第34讲 微生物的培养与应用 第2课时.docx

1、2022届高考生物一轮复习 知识讲义第十单元生物技术与工程 第34讲 微生物的培养与应用 第2课时考点二、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基及纯化大肠杆菌1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤：计算称量溶化灭菌倒平板。 （1）培养基需冷却至50左右时开始倒平板 原因：琼脂是一种多糖，在98以上熔化，在44以下凝固，倒平板时高于50则会烫手，低于50时若不能及时操作，琼脂会凝固。 估计培养基温度的方法：培养基从灭菌锅中取出冷却一段时间后用手触摸，感觉上以刚不烫手为准。 （2）平板倒置原因：平板皿盖上会凝结水珠，培养基表面的温度也较高，平板倒置后，既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入

2、培养基，造成污染。 （3）注意事项：倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物。 2纯化大肠杆菌 可以选用下述方法，在牛肉膏蛋白胨固体培养基上纯化大肠杆菌。（1）平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面（如图所示）。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。培养基表面平行或分区划线划线时要注意： 几次灼烧接种环及目的： a取菌种之前灼烧的目的：杀死接种环上原有的微生物。 b每次划线之前灼烧的目的：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，

3、使每次划线菌种数目减少。 c划线结束灼烧的目的：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。从第二次以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。（2）稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“无菌”，应特别注意： 酒精灯与培养皿的距离要合适。 吸管头不要接触任何其他物体。 吸管要在酒精灯火焰周围使用。考

4、点三、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1. 实验原理（1）以尿素为唯一氮源的选择培养基筛选尿素分解菌；有些微生物能产生并分泌脲酶，降解环境中的尿素做为其生长的氮源。（NH2) 2 C=O + H2O 2NH3 + CO2脲酶（2）尿素分解菌的鉴定酸碱指示剂法酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色范围是pH6.48.2，在酸性情况下呈黄色，碱性情况下呈红色（3）液体稀释涂布平板法测定微生物活菌数目2.培养基 LB全营养细菌培养基配方：蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、琼脂糖尿素培养基配方：葡萄糖、NaCl 、K2HPO4 、尿素、琼脂糖、酚红要点诠释：琼脂糖和琼脂一样都是作为凝固剂来使用的，不要

5、误以为是和葡萄糖一样提供碳源的。只是因为琼脂里还含有含氮的物质会对实验的结果造成影响。3.实验流程 考点四、分解纤维素的微生物的分离1.纤维素酶的作用机理 纤维素纤维二糖葡萄糖 纤维素酶是一种复合酶，由三种酶组成：C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖，只有在这三种酶的协同作用下，纤维素才能被彻底水解成葡萄糖。2.纤维素分解菌的筛选（1）筛选原理 纤维素+刚果红红色复合物，刚果红不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。（2）筛选方法：刚果红染色法。 在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红纤维素的复合物就无法形成，培养基中就会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。3.分离分解纤维素的微生物的实验设计 分离分解纤维素的微生物的实验流程示意图如下图所示：土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落