2023新教材高考生物二轮专题复习 突破等级考非选择题6 创设新情境考查细胞工程与基因工程.docx

1、突破等级考非选择题6创设新情境考查细胞工程与基因工程等级考再回访1.2022湖南卷水蛭是我国的传统中药材，主要药理成分水蛭素为水蛭蛋白中重要成分之一，具有良好的抗凝血作用。拟通过蛋白质工程改造水蛭素结构，提高其抗凝血活性。回答下列问题：(1)蛋白质工程流程如图所示，物质a是_，物质b是_。在生产过程中，物质b可能不同，合成的蛋白质空间构象却相同，原因是_。(2)蛋白质工程是基因工程的延伸，基因工程中获取目的基因的常用方法有_、_和利用 PCR 技术扩增。PCR 技术遵循的基本原理是_。(3)将提取的水蛭蛋白经甲、乙两种蛋白酶水解后，分析水解产物中的肽含量及其抗凝血活性，结果如图所示。推测两种处

2、理后酶解产物的抗凝血活性差异主要与肽的_(填“种类”或“含量”)有关，导致其活性不同的原因是_。(4)若要比较蛋白质工程改造后的水蛭素、上述水蛭蛋白酶解产物和天然水蛭素的抗凝血活性差异，简要写出实验设计思路_。22022山东卷某种类型的白血病由蛋白P引发，蛋白UBC可使P被蛋白酶识别并降解，药物A可通过影响这一过程对该病起到治疗作用。为探索药物A治疗该病的机理，需构建重组载体以获得融合蛋白FLAGP和FLAGP。P是缺失特定氨基酸序列的P，FLAG是一种短肽，连接在P或P的氨基端，使融合蛋白能与含有FLAG抗体的介质结合，但不影响P或P的功能。(1)为构建重组载体，需先设计引物，通过PCR特异

3、性扩增P基因。用于扩增P基因的引物需满足的条件是_、为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列，该限制酶识别序列应添加在引物的_(填“3端”或“5端”)。(2)PCR扩增得到的P基因经酶切连接插入载体后，与编码FLAG的序列形成一个融合基因，如图甲所示，其中“ATGTGCA”为P基因编码链起始序列。将该重组载体导入细胞后，融合基因转录出的mRNA序列正确，翻译出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正确，但P基因对应的氨基酸序列与P不同。据图甲分析，出现该问题的原因是_。修改扩增P基因时使用的带有EcoR识别序列的引物来解决该问题，具体修改方案是_。(3)融合蛋白表达成功后，将

4、FLAGP、FLAGP、药物A和UBC按照图乙中的组合方式分成5组。各组样品混匀后分别流经含FLAG抗体的介质，分离出与介质结合的物质并用UBC抗体检测，检测结果如图丙所示。已知FLAGP和FLAGP不能降解UBC，由组结果的差异推测，药物A的作用是_；由组或组的差异推测，P中缺失的特定序列的作用是_。(4)根据以上结果推测，药物A治疗该病的机理是_。考情总报告本讲中，基因工程考查频率明显高于其他工程，多结合情景考查基因工程特点、工具、操作程序，尤其是PCR、基因表达载体的构建及目的基因的检测与鉴定。细胞工程的考查频率仅次于基因工程，考查内容多涉及动物细胞培养与融合技术，体细胞核移植技术(常渗

5、透考查胚胎工程技术)，单克隆抗体的制备及植物组织培养和体细胞杂交技术。对胚胎工程的考查，经常将胚胎移植、胚胎分割、体外受精等技术渗透于动物细胞工程或基因工程中进行考查，复习时应尤其重视胚胎移植及干细胞应用技术。高分破瓶颈1.对于基因工程的知识，应重点掌握基因工程的三个工具、基因工程的基本操作程序。2加强重要的生物学术语的记忆，如“显微注射技术”、“基因表达载体的构建”、“花粉管通道法”等，避免在回答问题时由于出现错别字而失分。3细胞工程技术与其他生物工程技术之间关系密切，如通过转基因技术、动物细胞核移植、体外受精和胚胎早期培养获得的细胞需要利用细胞工程技术进行培养。4结合必修教材中减数分裂、受

6、精作用和有性生殖的知识理解动物的体内受精和胚胎发育。5联系选择性必修教材中基因工程、细胞工程的知识，理顺动物体内受精和体外受精之间的关系。模拟练规范1.2022广东实验中学模拟预测人体内的tPA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。通过基因工程技术可以大量制备基因工程药物tPA。(1)研究人员采用PCR技术可以获得大量tPA基因，PCR的原理是_。此外，大量获得tPA基因的方法还有_(答出1种)。(2)高质量的DNA模板是成功扩增目的基因的前提条件之一，在制备DNA模板时，可以用高温处理的方法去除其中的蛋白质，原因是_。(3)研究表明，为心梗患者注射大量tPA会诱发颅

7、内出血，其原因在于tPA与纤维蛋白结合的特异性不高，若将tPA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的tPA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因，可制造出性能优异的改良tPA蛋白。(注：如图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒，新霉素为抗生素。)请回答下列问题：以上制造出性能优异的改良tPA蛋白的过程被称为_。已知人tPA基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA，而丝氨酸的密码子为UCU，因此改造后的基因决定第84位丝氨酸的模板链的碱基序列应设计为_。如图所示，需选用限制酶Xma和_切开质粒pCLY11，才能与tPA改

8、良基因高效连接。与单一酶酶切相比，本操作采用的双酶切方法的优点是_。将连接好的DNA分子导入大肠杆菌，含tPA改良基因重组DNA分子的细胞应具有的性状是_。A新霉素抗性且呈蓝色B新霉素敏感且呈蓝色C新霉素抗性且呈白色D新霉素敏感且呈白色22022重庆南开中学模拟预测目前全球新冠肺炎疫情仍在流行。请回答下列问题：(1)判断是否感染新冠肺炎病毒常用的方法是对疑似患者进行_检测(答2种)。(2)目前，接种安全有效的疫苗是防治新冠肺炎最有效的措施。中国科学家分别从减毒活疫苗，灭活病毒疫苗、重组蛋白疫苗、重组病毒载体疫苗(通常选用复制缺陷型腺病毒为载体)，DNA疫苗、mRNA疫苗六大技术方向推进新型冠状

9、病毒疫苗的设计和研发。上述疫苗成分中含有有活性的病毒的是_(填序号)，从疫苗成分的角度分析，比对冷链运输要求低的原因是_。(3)灭活病毒疫苗的制备原理是用各种理化方法灭活病原微生物及其代谢产物，使其丧失_，但保持病毒的免疫原性，之后再通过纯化等步骤制备出候选疫苗，这种疫苗易于实现_(填“体液”或“细胞”或“特异性”)免疫且应答效果较好。(4)新型冠状病毒是一种单链RNA病毒，其表面的S蛋白是该病毒侵染人体细胞的关键蛋白，科学家欲利用大肠杆菌作为工程菌批量生产S蛋白以制备重组蛋白疫苗。已知Tetr为四环素抗性基因，LacZ基因的表达产物能使白色的大肠杆菌菌落变成蓝色，EcoR 的识别序列为GAA

10、TTCCTTAAG ，下图为部分流程图。从2019nCoV基因组中分离出的S基因不能直接与质粒重组，其原因是_，得到的S编码序列片段需要在两端加上_序列后才能与质粒连接。过程除了得到重组质粒外，还可能得到另外2种片段大小不一的结合产物，为筛选导入重组质粒的大肠杆菌，应_。最后，通过抗原抗体杂交技术检测大肠杆菌是否表达出目标产物。32022湖南省高三模拟诱导性多能干细胞(iPS细胞)最初是日本科学家山中伸弥(Shinya Yamanaka)于2006年利用病毒载体将四个转录因子(Oct4，Sox2，Klf4和cMyc)的组合转入分化的体细胞中，使其重编程而得到的类似胚胎干细胞和胚胎APSC多能细

11、胞的一种细胞类型。2007年11月，由中国科学家俞君英领衔的Thompson实验室和山中伸弥实验室几乎同时报道，利用iPS技术同样可以诱导人皮肤纤维母细胞成为几乎与胚胎干细胞完全一样的多能干细胞。下图1表示的是我国科学家获得iPS细胞，再将iPS细胞转入小鼠乙体内培养的过程，图2表示研究人员利用小鼠(2N40)获取单倍体胚胎干细胞的一种方法。请回答下列问题：(1)图1过程中，成纤维细胞转变为iPS细胞，类似于植物组织培养中的_过程。(2)研究人员将iPS细胞团注射入缺乏T细胞的小鼠体内，细胞团能继续生长，由此可推测图1中iPS细胞团逐渐退化的原因可能是_。(3)图2中，研究人员给小鼠丙注射促性

12、腺激素的目的是_，再利用SrCl2溶液处理后，体外培养至_(填序号及名称)，再筛选出_。(4)研究发现，单倍体胚胎干细胞有发育全能性，该技术培育的单倍体动物可成为研究_(填“显性基因”或“隐性基因”)功能的理想细胞模型。为提高胚胎的利用率，可以采用胚胎分割技术，应该选用发育良好、形态正常的_进行分割。(5)胚胎工程最后一道工序的实质是_。42022山东省济南市高三一模试题研究发现，酵母细胞基因转录需要转录因子，转录因子是组件式蛋白质，包括DNA结合功能域(DNABD)和转录激活结构域(DNAAD)，两者分开时具有功能，但不能激活转录，如果将待测蛋白质X与DNABD融合，蛋白质Y与DNAAD融合

13、，蛋白质X和Y有相互作用时，两结构域能重新呈现完整转录因子活性，并可激活报告基因启动子，过程如图1所示。科研人员为了验证蛋白质X和Y是否具有相互作用及作用位置是位于蛋白质的氨基端还是羧基端，分别PCR扩增蛋白质X和Y的全长基因序列、编码氨基端603个氨基酸片段的基因序列、编码羧基端539个氨基酸片段的基因序列，分别构建不同的酵母表达载体(如图2和图3所示)，其中Ampr为氨苄青霉素抗性基因，HIS3和TRP1分别为控制组氨酸和色氨酸合成的基因。空白载体或单独一种载体均不能激活报告基因，载体对酵母菌无毒害作用。回答下列问题：(1)为了将pLexAJL和pB42AD载体分别与蛋白质X和Y的三种基因

14、序列连接，需要先进行PCR扩增蛋白质X基因和蛋白质Y基因的6种序列，共需要设计_种引物；扩增后再用限制酶_和_分别切割蛋白质X基因的3种序列和Y基因的3种序列。构建好pLexAJL和pB42AD基因表达载体后，为确定是否成功，需要酶切两种载体后，根据_结果观察是否出现预期大小的目标条带。(2)色氨酸和亮氨酸合成缺陷型酵母菌菌株是实验室常用的营养缺陷型菌株，将成功构建的上述基因表达载体通过_法导入到处于感受态的色氨酸和亮氨酸合成缺陷型酵母菌中，在培养基中需添加_用于筛选成功导入基因表达载体的酵母菌。(3)两种载体成功导入酵母菌并表达，结果为蛋白质X和蛋白质Y、蛋白质X羧基端和蛋白质Y、蛋白质X和

15、蛋白质Y羧基端、蛋白质X羧基端和蛋白质Y羧基端之间有相互作用。据此可推测的结论是_。不同蛋白质之间相互作用是通过检测_得到的。【名师再叮咛】非选择题(长填空)的规范作答一、答题要求1答题时要使用生物学专业术语。注重理解多种类型的术语，如对于生物学概念、原理、形态、生理功能、比较概念间的区别联系，尽量用课本用语进行表述。对说明性的表达，常常可以落脚到课本上的结论性语句上。2答题要注意语言的完整性。综合近年考试情况来看，学生最容易出错、失分的都在概念表述不准确方面。因此，注重细节，强化课本概念性语句的准确掌握是学生复习的关键。这要求学生对课本中重要概念、专业词语有准确的记忆和表达，在答题时，要尽量

16、用简练、精确的生物语句，话要说完整，要让别人能看明白，而不仅仅是自己心中知道。3答题既要准确也要做到层次清晰。答题时，要全、准、简，即审题时先分析出有几个要点，回答时既要答全点，又要正确、简短；注意语言一定要紧贴题意，表达要准确、简明扼要，语句不能有语病。4在解答问题时需要遵循的几个原则(1)回答基本概念时宜“小”不宜“大”。生物学概念很多，其中不少概念的字词相近或相似，而且大概念中又包含了若干个小概念，容易引起概念的混淆，导致张冠李戴，甚至把大概念当作小概念用。在用概念术语回答生物学问题时，适合小概念的不宜用大概念，即答的内容要具体。如回答叶绿体的功能时，宜答“进行光合作用”，不宜答“进行新

17、陈代谢”。(2)回答基本结构时宜“细”不宜“粗”。生物体的结构有宏观结构和微观结构，细胞结构又可分为显微结构和亚显微结构。在答一些生理反应的位点、代谢场所、分泌部位、物质存在的具体结构时都必须说出更细微的结构。如答光合作用暗反应的场所时，应答“叶绿体基质”，而不能答“叶绿体”或“叶肉细胞”等。二、评分时的原则1“多种答案”原则在一些开放性试题中，答案可能不是唯一的，合理的均得分；有错误的，根据错误的性质。参照评分参考中相应的规定评分。2易于辨别，修正清楚原则凡是辨别不清的，皆为“0”分。所以答题时，字不一定要很漂亮，但须十分清晰，易于辨认。有两种情况存在，其一是学生在修改答案时，改动不够坚决、

18、不够清楚，如由A改成B，由B又改成D。中间修改不清楚，难以辨认；其二是不排除学生有投机心理，让评卷老师去猜。另外有些学生开始答卷(题)时，没有把握，用铅笔答题，最后也没有用签字笔重新确定，导致扫描时图像不够清晰，造成重大失分。3“见空给分”原则在连续多个答案中，为了便于操作。通常采用“独立操作，互不牵连”的原则，即前面一个答案的正确与否，不影响后面答案的给分；同理，如前者正确，而后者错误，也按步骤照样给分，虽然此法可能让部分人占了便宜，但也不能冤枉一些人，而且便于操作。突破等级考非选择题6等级考再回访1解析：（1）物质a是氨基酸序列多肽链，物质b是mRNA。在生产过程中，物质b可能不同，合成的

19、蛋白质空间构象却相同，原因是密码子的简并性，即一种氨基酸可能有几个密码子。（2）蛋白质工程是基因工程的延伸，基因工程中获取目的基因的常用方法有从基因文库中获取目的基因、通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成和利用 PCR 技术扩增。PCR 技术遵循的基本原理是 DNA双链复制。（3）将提取的水蛭蛋白经甲、乙两种蛋白酶水解后，据图可知，水解产物中的肽含量随着酶解时间的延长均上升，且差别不大；而水解产物中抗凝血活性有差异，经酶甲处理后，随着酶解时间的延长，抗凝血活性先上升后相对稳定，经酶乙处理后，随着酶解时间的延长，抗凝血活性先上升后下降，且酶甲处理后的酶解产物的抗凝血活性最终高于经酶乙处理后的酶

20、解产物的抗凝血活性，差异明显，据此推测两种处理后酶解产物的抗凝血活性差异主要与肽的种类有关，导致其活性不同的原因是提取的水蛭蛋白的酶解时间和酶的种类不同，导致水蛭蛋白空间结构有不同程度破坏。（4）若要比较蛋白质工程改造后的水蛭素、上述水蛭蛋白酶解产物和天然水蛭素的抗凝血活性差异，实验设计思路：取3支试管，分别加入等量的蛋白质工程改造后的水蛭素、上述水蛭蛋白酶解产物和天然水蛭素；用酒精消毒，用注射器取同一种动物（如家兔）血液，立即将等量的血液加入1、2、3号三支试管中，静置相同时间，统计三支试管中血液凝固时间。答案：（1）氨基酸序列多肽链mRNA密码子的简并性（2）从基因文库中获取目的基因通过D

21、NA合成仪用化学方法直接人工合成DNA双链复制（3）种类提取的水蛭蛋白的酶解时间和处理的酶的种类不同，导致水蛭蛋白空间结构有不同程度破坏（4）取3支试管，分别加入等量的蛋白质工程改造后的水蛭素、上述水蛭蛋白酶解产物和天然水蛭素；用酒精消毒，用注射器取同一种动物（如家兔）血液，立即将等量的血液加入1、2、3号三支试管中，静置相同时间，统计三支试管中血液凝固时间2解析：（1）引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核苷酸，因此设计扩增P基因的引物，需要两种引物分别与两条模板链3端的碱基序列互补。DNA聚合酶延伸时，是将脱氧核苷酸加到引物的3端，为了不破坏目的基因，该限制酶识别序列应

22、添加在引物的5端。（2）融合基因转录出的mRNA序列正确，翻译出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正确，但P基因对应的氨基酸序列与P不同，说明P基因翻译时出错。由图可看出，在转录出的mRNA中，限制酶识别序列对应的最后两个碱基与P基因对应的第一个碱基构成一个密码子，导致读码框改变，翻译出的氨基酸序列改变，可通过在EcoR识别序列前后增加碱基，使其碱基数目加上FLAG的碱基数目为3的倍数，这样能保证P基因转录出的mRNA上的读码框不改变，能够正常翻译。（3）组仅添加UBC，处理后，用UBC抗体检测，不出现杂交带；组添加UBC和FLAGP，出现杂交带；组添加UBC、药物A和FLAGP，杂交带更加明显

23、，说明药物A的作用是促进UBC与FLAGP的结合。由组或组的差异在于组使用FLAGP，出现杂交带；组使用FLAGP，不出现杂交带，据此推测P中缺失的特定序列是与UBC结合的关键序列。（4）根据（3）的分析推测，药物A促进UBC与FLAGP的结合，从而促进蛋白P被蛋白酶识别并降解，达到治疗的目的。答案：（1）两种引物分别与两条模板链3端的碱基序列互补配对5端（2）在转录出的mRNA中，限制酶识别序列对应的最后两个碱基与P基因对应的第一个碱基构成一个密码子，导致读码框改变，翻译出的氨基酸序列改变在EcoR识别序列前后增加碱基，使其碱基数目加上FLAG的碱基数目为3的倍数（3）促进UBC与FLAGP

24、的结合P中缺失的特定序列是与UBC结合的关键序列（4）药物A促进UBC与FLAGP的结合，从而促进蛋白P被蛋白酶识别并降解，达到治疗的目的模拟练规范1解析：（1）PCR是指体外合成DNA的技术，其原理是DNA半保留复制。对于基因比较小，核苷酸序列已知，也可以直接使用DNA合成仪用化学方法直接人工合成，此外还可从基因文库中直接获取。（2）根据蛋白质在高温条件下会变性失活，而DNA虽然在高温时会变性，但在低温时又会复性的特征，在制备DNA模板时，可以用高温处理的方法去除其中的蛋白质，从而获得较纯净的DNA模板。（3）天然的tPA基因控制tPA蛋白的合成，改良tPA蛋白需要对天然的tPA基因进行序列

25、改造，然后用改造的基因作为目的基因让其表达，从而实现对天然蛋白质的改造，题中性能优异的改良tPA蛋白的过程被称为蛋白质工程，已知人tPA基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA，而丝氨酸的密码子为UCU，根据碱基互补配对原则可推测，改造后的基因决定第84位丝氨酸的模板链的碱基序列应设计为AGA。目的基因两端的黏性末端图中已经给出，观察各限制酶的识别序列可知，限制酶Xma和Bgl切割产生的粘性末端能与目的基因的黏性末端碱基互补，要想把目的基因与质粒pCLY11 拼接起来需要得到相同的黏性末端，因此质粒pCLY11也需要限制酶Xma和Bgl切割；基因工程中最核心的一个环节为基因表达载体的构建，

26、目的是让目的基因在受体细胞中稳定存在并且遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用，这里用两种不同的限制酶切割质粒的目的是为了使其呈现两种不同的黏性末端分别与目的基因的两个黏性末端连接，这样可以保证目的基因和质粒的正向连接，同时也可避免目的基因和质粒的自身环化。结合图示可知，限制酶Xma 和Bgl 会破坏质粒pCLY11上的mlacZ，但不会破坏neor（新霉素抗性基因），导入重组质粒的大肠杆菌具有新霉素抗性，但由于mlacZ基因被破坏，因而菌落呈现白色，而导入pCLY11质粒的大肠杆菌，既有新霉素抗性，且mlacZ基因也能正常表达，因而菌落呈现蓝色。当然这里作为受体细胞的大肠杆菌应该不具

27、有pCLY11质粒，据此可将成功导入目的基因的大肠杆菌筛选出来。答案：（1）DNA半保留复制（DNA双链复制）（化学方法）人工合成、从基因文库中获取（2）蛋白质在高温条件下会变性失活，而DNA虽然在高温时会变性，但在低温时又会复性（3）蛋白质工程AGABgl防止质粒载体（和目的基因）自身环化C2解析：（1）新型冠状病毒感染者体内含有新冠病毒以及机体产生的与新冠病毒特异性结合的抗体，故判断是否感染新冠肺炎病毒常用的方法是对疑似患者进行核酸和抗原检测。（2）减毒活疫苗、灭活病毒疫苗、重组蛋白疫苗、重组病毒载体疫苗、DNA疫苗、mRNA疫苗中减毒疫苗使病毒失去致病性，但保留了原有的增殖能力和免疫原性

28、，有活性，重组病毒载体疫苗是以病毒作为载体，病毒有活性，所以有活性病毒为。从疫苗成分的角度分析，为核酸疫苗，为蛋白质类疫苗，蛋白质空间结构易受温度影响，而DNA热稳定性高，因此比对冷链运输要求低。（3）灭活病毒疫苗经过“灭活”处理后丧失致病性，但保持病毒的免疫原性，其抗原仍能引起机体产生特异性免疫，这种疫苗易于实现特异性免疫且应答效果较好。（4）因为2019nCoV的核酸为单链RNA，获得的基因也为单链RNA，不能直接与双链DNA相连，故从2019nCoV基因组中分离出的S基因不能直接与质粒重组。据图可知，EcoR 酶切后的黏性末端暴露出的碱基为AATT，故过程得到的S编码序列片段两端需要分别

29、加上TTAA序列后才能与质粒连接。分析题意可知，质粒上LacZ基因会被EcoR 破坏，质粒上有四环素抗性基因，故为筛选导入重组质粒的大肠杆菌，可在培养基中加入四环素，则在该种培养基上含重组质粒的大肠杆菌可以存活；又因重组质粒的LacZ基因被破坏，故其不能变成蓝色，为白色，故筛选出白色菌落即可。答案：（1）核酸和抗原（2）蛋白质空间结构易受温度影响，而DNA热稳定性高（3）致病性特异性（4）2019nCoV的基因为单链RNA，不能直接与DNA相连TTAA在培养基中加入四环素，筛选白色菌落3解析：（1）图1过程中，成纤维细胞转变为iPS细胞，即从高度分化的细胞形成分化程度低的细胞，过程类似于植物组

30、织培养中的脱分化过程。（2）将iPS细胞团注射入缺乏T细胞的小鼠体内，细胞团能继续生长，由此可推测图1中iPS细胞团逐渐退化的原因是小鼠乙（受体）发生免疫排斥反应，使得iPS细胞团失去生命力导致的。（3）图2中，对实验小鼠丙注射促性腺激素的目的是使其超数排卵，从而获得更多的卵母细胞，再利用SrCl2溶液处理、激活卵母细胞，并在体外培养至囊胚期，再利用流式细胞仪筛选出单倍体胚胎干细胞。（4）单倍体胚胎干细胞也能分化，形成不同功能的细胞、组织和器官，该技术培育的单倍体动物可成为研究隐性基因功能的理想细胞模型，因为显性基因在正常的生物体内也能表达。为提高胚胎的利用率，可以采用胚胎分割技术，应该选用发

31、育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚进行分割。（5）胚胎工程最后一道工序是胚胎移植，胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移。答案：（1）脱分化（2）小鼠乙发生免疫排斥反应，使得iPS细胞团失去生命力（3）使其超数排卵（或是雌性小鼠超数排卵）囊胚期 单倍体胚胎干细胞（4）隐性基因桑葚胚或囊胚（5）早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移4解析：（1）扩增蛋白质X基因和蛋白质Y基因全序列分别需要2种引物，共需4种；单独扩增蛋白质X的氨基端基因序列需要额外1种引物（其中一种引物与扩增蛋白质X基因全序列时相同），同理单独扩增蛋白质X羧基端基因、蛋白质Y氨基端基因、蛋白质Y羧基端基因各额

32、外需要1种引物，共4种；故使用PCR扩增技术对蛋白质X基因和蛋白质Y基因的6种序列进行扩增，需8种引物。在构建基因表达载体时，需使用同种限制酶切割目的基因与载体，使其形成相同末端以便使用DNA连接酶进行连接。观察可知pLexA一JL载体的目的基因插入位点含有的酶切位点对应限制酶分别为EcoR 和BamH ，pB42AD载体的目的基因插入位点含有的酶切位点对应的限制酶分别为EcoR 和Xho。构建好基因表达载体后，可以使用DNA电泳，观察电泳结果是否出现预期大小的目标条带，来确定表达载体构建是否成功。（2）将目的基因导入微生物细胞常用的方法为Ca2处理法。表达载体上所含有的标记基因为Ampr基因

33、，即氨苄青霉素抗性基因。可通过向培养基中加入氨苄青霉素，观察细胞的存活状态来确定转化是否成功，能在添加了氨苄青霉素的培养基上存活的微生物即为已完成转化的酵母菌。（3）蛋白质X和蛋白质Y均具有氨基端和羧基端，能观察到蛋白质X和蛋白质Y结合的结果，说明蛋白质X和蛋白质Y之间有相互作用；同时能观察到蛋白质X羧基端和蛋白质Y、蛋白质X和蛋白质Y羧基端、蛋白质X羧基端和蛋白质Y羧基端的作用结果，说明蛋白质X和蛋白质Y的作用位置分别在两种蛋白质的羧基端。由于只有当蛋白质X和蛋白质Y相互作用时，转录因子的DNA结合功能域（DNABD）和转录激活结构域（DNAAD）才能发挥作用，进而激活报告基因的启动子，从而驱动对报告基因（LacZ基因）的转录，进而得以表达。因此，可以通过检测报告基因（LacZ基因）的表达情况来确定不同蛋白质之间是否发生作用。答案：（1）8EcoR 、BamH EcoR 、Xho电泳（2）Ca2处理氨苄青霉素（3）蛋白质X和Y之间具有相互作用，X蛋白和Y蛋白作用位置在羧基端报告基因的表达（或LacZ的表达）